Quantification of glycophorin A and glycophorin B on normal human RBCs by flow cytometry.

BACKGROUND: The quantification of antigens and proteins on RBCs has been achieved by different approaches. Flow cytometry allows the results of the earliest studies to be to reappraised because it offers the possibility of measuring the immunofluorescence intensity of single cells and integrating the individual data of a large number of cells within a very short time. STUDY DESIGN AND METHODS: Flow cytometry was used in this work to analyze the binding of four MoAbs to glycophorin A (GPA) and glycophorin B (GPB). RBCs in their native state (nonfixed) were utilized. To avoid the agglutination problem, cells were disaggregated before measurements, dates were taken on 20,000 events on the single-cell region, and the fluorescence intensity of the principal peak present in the fluorescence histograms was used for the analysis. The quantification of sites per RBC was estimated by applying the Langmuir adhesion model. RESULTS: The numbers of GPA and GPB sites obtained for samples from healthy donors were similar to those found in the literature (1.86-4.9) x 10(5) and (0.48-1.61) x 10(5) for GPA and (0.21-1.14) x 10(5) and (0.47-0.88) x 10(5) for GPB. Differences between antibodies were found that depend on the binding site of each one. CONCLUSION: A simple method to quantify antigen sites on RBCs was developed. It could be applied whenever one antibody is assumed to bind exactly one antigen.

Inmuno-hemo-reología: análisis termodinámico de la aglutinación eritrocitaria inmunológica / Immuno-hemo-reology: Thermodynamic analysis of immunological agglutination of erythrocites

La aglutinación inmunológica es la consecuencia de la reacción Ag-Ac que adhiere eritrocitos adyacentes. Los anticuerpos se fijan a los sitios antigénicos distribuidos sobre la superficie de la membrana eritrocitaria, actuando como anclajes moleculares para unir células adyacentes y formas aglutinadas. Una pequeña cantidad de energía es disipada durante la reacción. Si se suministra una cantidad de trabajo mecánico equivalente a la energía disipada, los aglutinatos pueden ser disociados. El trabajo mecánico es realizado por tensiones de corte generadas en un viscosímetro de tipo Couette. Se propone una nueva técnica que utiliza la retrodifusión de un haz láser para analizar la cinética de disociación de aglutinatos eritrocitarios inmunológicos, producida por cizallamiento de los aglutinatos en suspensión. La intensidad del láser, retrodifundida, aumenta en la medida que los aglutinatos son disociados por corte. El registro de la intensidad retrodifundida suministra una curva de disociación que es ajustada por una ecuación exponencial. Los parámetros que caracterizan esta ecuación muestran una buena correlación con la potencia de la aglutinación. La integración numérica de las curvas de disociación conduce a la obtención de un parámetro ED que estima la energía intercambiada en el proceso de disociación y, en consecuencia, la constante de afinidad.

Inmuno-hemo-reología: análisis termodinámico de la aglutinación eritrocitaria inmunológica / Immuno-hemo-reology: Thermodynamic analysis of immunological agglutination of erythrocites

La aglutinación inmunológica es la consecuencia de la reacción Ag-Ac que adhiere eritrocitos adyacentes. Los anticuerpos se fijan a los sitios antigénicos distribuidos sobre la superficie de la membrana eritrocitaria, actuando como anclajes moleculares para unir células adyacentes y formas aglutinadas. Una pequeña cantidad de energía es disipada durante la reacción. Si se suministra una cantidad de trabajo mecánico equivalente a la energía disipada, los aglutinatos pueden ser disociados. El trabajo mecánico es realizado por tensiones de corte generadas en un viscosímetro de tipo Couette. Se propone una nueva técnica que utiliza la retrodifusión de un haz láser para analizar la cinética de disociación de aglutinatos eritrocitarios inmunológicos, producida por cizallamiento de los aglutinatos en suspensión. La intensidad del láser, retrodifundida, aumenta en la medida que los aglutinatos son disociados por corte. El registro de la intensidad retrodifundida suministra una curva de disociación que es ajustada por una ecuación exponencial. Los parámetros que caracterizan esta ecuación muestran una buena correlación con la potencia de la aglutinación. La integración numérica de las curvas de disociación conduce a la obtención de un parámetro ED que estima la energía intercambiada en el proceso de disociación y, en consecuencia, la constante de afinidad. (AU)

Influencia del colesterol en membrana sobre la deformabilidad y la fragilidad osmótica eritrocitarias / Variation of erythrocyte deformability and osmotic fragility with cholesterol

La incorporación de colesterol (hemisuccinato de colesterol) a la membrana eritrocitaria afecta sus propiedades reológicas. Esta influencia ha sido evaluada a través de dos parámetros reológicos característicos de la membrana celular: la deformabilidad celular y la fragilidad osmótica. Para ello se aplicaron dos técnicas ambas basadas en el fenómeno de difracción láser, cada una de las cuales presenta diferente sensibilidad de respuesta. Se aplicaron dos protocolos de incubación (12 h a 25ºC el primero y 12 h a 25ºC + 12 h a 37ºC el segundo); en cada uno de ellos se fue variando la cantidad de colesterol incorporado, expresado como Tasa Colesterol/Proteína (Tcp = 0,18 a 0,83). La alteración de las propiedades reológicas de la membrana eritrocitaria producida por la incorporación de colesterol se traduce por una reducción de la deformabilidad celular y por un aumento de la fragilidad osmótica. Se observó que tanto la deformabilidad como la fragilidad, aparecen en relación inversa a la concentración de colesterol incorporado. Sin embargo, deben considerarse que tipos diferentes de deformación se aplican en cada técnica: transformación a esferocito en la fragilidad osmótica y cisallamiento en la deformabilidad

Influencia del colesterol en membrana sobre la deformabilidad y la fragilidad osmótica eritrocitarias / Variation of erythrocyte deformability and osmotic fragility with cholesterol

La incorporación de colesterol (hemisuccinato de colesterol) a la membrana eritrocitaria afecta sus propiedades reológicas. Esta influencia ha sido evaluada a través de dos parámetros reológicos característicos de la membrana celular: la deformabilidad celular y la fragilidad osmótica. Para ello se aplicaron dos técnicas ambas basadas en el fenómeno de difracción láser, cada una de las cuales presenta diferente sensibilidad de respuesta. Se aplicaron dos protocolos de incubación (12 h a 25ºC el primero y 12 h a 25ºC + 12 h a 37ºC el segundo); en cada uno de ellos se fue variando la cantidad de colesterol incorporado, expresado como Tasa Colesterol/Proteína (Tcp = 0,18 a 0,83). La alteración de las propiedades reológicas de la membrana eritr